-86℃低溫冰箱在冰凍切片上的應(yīng)用

   隨著超低溫冰箱技術(shù)的不斷發(fā)展，超低溫冰箱在醫(yī)用領(lǐng)域也逐漸被廣泛應(yīng)用。例如-86℃低溫冰箱在冰凍切片上的應(yīng)用，那就是冰凍切片環(huán)節(jié)中速凍，以減少冰晶形成。

    免疫組織化學(xué)染色中zui常用的一種切片方法，就是冰凍切片。它zui突出的優(yōu)點(diǎn)，就是能夠較完好地保存多種抗原的免疫活性，尤其是細(xì)胞表面抗原，更應(yīng)采用冰凍切片。新鮮的組織及已固定的組織均可作冰凍切片。冰凍時(shí)，組織中水份易形成冰晶，往往影響抗原定位。一般認(rèn)為冰晶少而大時(shí)，影響較小，冰晶小而多時(shí)，對(duì)組織結(jié)構(gòu)損害較大，在含水量較多的組織中上述現(xiàn)象更易發(fā)生。冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數(shù)量愈多則愈小，對(duì)組織結(jié)構(gòu)影響愈嚴(yán)重。因此，應(yīng)盡量降低冰晶的數(shù)量。Fish認(rèn)為冰凍開始時(shí)，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃，從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加達(dá)1018，然后再減慢?；谏鲜隼碚摽刹扇∫韵麓胧p少冰晶的形成。

（1）速凍，使組織溫度驟降，縮短從-33℃到-43℃的時(shí)間，減少冰晶的形成。

其方法有二：

①干冰-丙酮（酒精）法：將150-200ml丙酮（酒精）裝入小保溫杯內(nèi)，逐漸加入干冰，直至飽和呈粘稠狀，再加干冰不再昌泡時(shí)，溫度可達(dá)-70℃，用一小燒杯（50-100ml）內(nèi)裝異戊烷約50ml，再將燒杯緩慢置入干冰丙酮（純酒精）飽和液內(nèi)，至異戊烷溫度達(dá)-70℃時(shí)即可使用。將組織（大小為1cm×0.8cm×0.5cm）投入異戊烷內(nèi)速凍30-60s后取出，或置恒冷箱內(nèi)以備切片，或置-86℃低溫冰箱內(nèi)貯存。

②液氮法：將組織塊平放于軟塑瓶蓋或特制小盒內(nèi)（直徑約2cm），如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織，然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內(nèi)，當(dāng)盒底部接觸液氮時(shí)即開始?xì)饣序v，此時(shí)小盒保持原位切勿浸入液氮中，大約10-20s組織即迅速冰結(jié)成塊。取出組織冰塊立即置入-86℃低溫冰箱貯存?zhèn)溆茫蛑萌牒憷湎淝衅瑱C(jī)冰凍切片。

-86℃低溫冰箱參數(shù)：

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